人microRNA基因检测试剂盒

检测基因：hsa-miR-126-3p、hsa-miR-27a-3p 、hsa-miR-92b-3p、hsa-miR-199a-3p、hsa-miR-155-5p（可根据客户需求定制）

储存条件：避光，-20 ℃，保质2年

人microRNA基因检测试剂盒简介：

本试剂盒用于人源血液、血浆、外泌体、组织及细胞中MicroRNA含量及表达水平检测。

本试剂盒采用茎环法检测MicroRNA，试剂盒包含各MicroRNA第一链cDNA合成逆转录特异性颈环引物，以及Real Time RT-PCR Mix、MicroRNA特异性QPCR上游引物、颈环通用QPCR下游引物等各组分。

产品特点：

★使用简单：本试剂盒囊括microRNA检测所需所有试剂，并为您特别优化了反应体系及条件，使用简单、方便。

★高特异性：本试剂盒包含MicroRNA特异性茎环逆转录引物，特异性定量PCR扩增上游引物及内参U6引物，所有MicroRNA QPCR扩增产物熔解曲线峰图均为特异性单峰，且电泳条带单一。

★高灵敏度：检测范围广，能同时适用于高表达及低表达MicroRNA的检测。

★节约成本：采用颈环法检测，使用试剂盒体系一次性可检测多个样本，较之加尾法极大的节约了检测成本。

MicroRNA简介：

MicroRNA (miRNA) 是一类由内源基因编码的长度约为20~24 个碱基的非编码单链RNA分子，它由具有发夹结构的约70~90碱基大小的单链RNA前体经过Dicer酶加工后生成。大多数miRNA 基因以单拷贝、多拷贝或基因簇(cluster) 的形式存在于基因组中，它们在动植物细胞中参与转录后基因表达调控。

其广泛存在于真核生物中，对细胞内mRNA起转录调控功能，几个miRNAs可以调节同一个基因，可以通过几个miRNAs的组合来精细调控某个基因的表达。

MicroRNA作用方式：

microRNA-RISC对靶基因mRNA的作用主要取决于它与靶基因转录体序列互补的程度，目前已知的有三种方式。
第一种是切断靶基因的mRNA分子：miRNA与靶基因完全互补结合，作用方式和功能与siRNA非常相似，最后切割靶mRNA。在植物中，大部分miRNA都以这种方式，靶基因mRNA断裂后，无poly(A)的分子的3" 端加上多个U并很快降解，含poly(A)的分子能稳定存在一段时间。
第二种是抑制靶基因的翻译：miRNA作用时与靶基因不完全互补结合，进而阻遏翻译而不影响mRNA的稳定性，这种miRNA是目前发现最多的种类（如线虫lin-4）。而在植物中极少数的miRNA通过此方式来抑制靶基因。
第三种是结合抑制：具有以上两种作用模式：当与靶基因互补结合时，直接靶向切割mRNA；当与靶基因不完全结合时，起调节基因表达的作用。

MicroRNA检测手段：

（1）目前已有的miRNA检测方法包括 Northern Blot、miRNA微阵列芯片、Real Time PCR等技术。其中Northern Blot是一种操作复杂且稳定性较差的方法，而且由于miRNA本身碱基数过少，使得探针碱基序列的选择受限，因此该方法目前使用较少。miRNA芯片也是一种常用方法，但是由于该方法需要特定的仪器，且单样本成本较高，很难实现高通量样本的检测，限制了该方法的使用范围。目前应用最多的检测方法就是miRNA Real Time PCR检测法，又分为加尾法和颈环法。
（2）加尾法是通过Poly（A）加尾酶使miRNA的3" 端连接上一段40~60 bp的序列，从而延长cDNA的长度，但该加尾是非特异性进行的，会使所有种类的RNA均被加尾，从而使检测过程中的干扰模板增加，扩增特异性较差。
（3）茎环法是针对每一条miRNA序列设计特异性的逆转录产物，该逆转录引物长度约50~60 bp，能特异性识别miRNA 3" 端序列，且引入“尾巴”含有颈环结构，使得逆转录产物具有良好的稳定性，在PCR过程中再配合特异性miRNA 上游检测引物，因此检测结果可信度远高于加尾法。除此之外，茎环法逆转录使用普通逆转录试剂盒即可进行，检测成本低，而加尾法则需要特殊的加尾逆转录试剂盒，检测成本较高。